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實驗室離心機(jī)方法選擇
點擊次數(shù):910 更新時間:2023-11-21

實驗室離心機(jī)常見的有差速離心法、速率區(qū)帶離心機(jī)和等密度區(qū)離心法,它們在不同的實驗場景下有不同的應(yīng)用。


1. 差速離心法:差速離心法是一種常見的離心方法,通過調(diào)整離心機(jī)轉(zhuǎn)速,使樣品在離心管中形成不同的沉降速度,從而實現(xiàn)分離。這種方法適用于分離不同密度的物質(zhì),如細(xì)胞、蛋白質(zhì)、DNA等。常見的差速離心機(jī)有常規(guī)離心機(jī)和超速離心機(jī)。

差速離心法.png


操作過程中一般是在第一級離心后將上清液與沉淀分開,然后將上清液再在更高轉(zhuǎn)速條件下離心,分離出第二部分沉淀,如此往復(fù)逐級加高轉(zhuǎn)速,逐級分離出所需要的物質(zhì)。差速離心的分辨率不高,沉淀系數(shù)在同一個數(shù)量級內(nèi)的各種粒子不容易分開,常用于生化樣品的粗制品提取。


2. 速率區(qū)帶離心機(jī):速率區(qū)帶離心機(jī)是一種特殊的離心機(jī),通過調(diào)整離心機(jī)轉(zhuǎn)速和離心管中的密度梯度,使樣品在離心過程中形成不同的速率區(qū)帶,從而實現(xiàn)分離。這種方法適用于分離復(fù)雜的混合物,如蛋白質(zhì)、核酸等。速率區(qū)帶離心機(jī)可以實現(xiàn)高分辨率的分離效果。

離心帶法.png


比如要從靜脈血中分離出單個核細(xì)胞,前一種分離液Ficoll將血液中的所有單個核細(xì)胞(淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞)分為一個層,同時提取。而Percoll分離液將血液中淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞分為兩個梯度層,分別提取。梯度液在離心過程中以及離心完畢后取樣時,起著支持介質(zhì)和穩(wěn)定劑的作用,避免因機(jī)械振動而引起已分層的粒子重懸。


采用速率區(qū)帶離心法時,需要嚴(yán)格控制離心時間,既要有足夠的時間使各種粒子在介質(zhì)梯度液中形成區(qū)帶,又要避免任一待分離粒子形成沉淀狀態(tài)。


3. 等密度區(qū)離心法:等密度區(qū)離心法是一種特殊的離心方法,通過調(diào)整離心機(jī)轉(zhuǎn)速和離心管中的密度梯度,使樣品在離心過程中形成不同的密度區(qū)帶,從而實現(xiàn)分離。這種方法適用于分離密度相近的物質(zhì),如細(xì)胞亞細(xì)胞器、病毒等。等密度區(qū)離心法可以實現(xiàn)高純度的分離效果。


等密度區(qū)帶離心.png


等密度區(qū)帶離心的離心效果取決于顆粒的浮力密度差,密度差越大,分離效果越好,與顆粒的大小和形狀無關(guān),但后兩者決定著達(dá)到平衡的速率、時間和區(qū)帶的寬度。


等密度區(qū)帶離心方法的特點:

(1)與樣品粒子的密度有關(guān);

(2)與樣品粒子的大小和其他參數(shù)無關(guān) ;

(3)轉(zhuǎn)速、溫度不變,則延長離心時間也不能改變這些粒子的成帶位置。




在選擇離心方法時,需要根據(jù)實驗?zāi)康摹悠诽匦院碗x心機(jī)設(shè)備的性能來確定最合適的方法。同時,操作時要注意遵循離心機(jī)的使用說明和實驗室的安全操作規(guī)程,確保實驗的準(zhǔn)確性和安全性。


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